| 反應(yīng)種屬 | 人 |
| 檢測范圍 | |
| 物理性能 | 各液體組分澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。 |
| 用途 | 僅供科研使用，定性檢測血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中人乙酰膽堿受體IgA抗體（AChR IgA）。 |
| 實(shí)驗(yàn)原理 | 本試劑盒采用間接兩步法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。在預(yù)包被人乙酰膽堿受體IgA抗體（AChR IgA）捕獲抗原（固相抗原）的微孔酶標(biāo)板中，加入陰陽性對(duì)照和待測樣本，經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，再加入 HRP 標(biāo)記的檢測抗體（酶標(biāo)抗體），經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗體-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀上測定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）與待測樣品中待測抗體的濃度呈正相關(guān)，根據(jù)閾值判斷陰陽性。 |
| 特異性 | / |
| 重復(fù)性 | 批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于 10%；批間變異系數(shù) CV%小于 15%。 |
| 回收率 | / |
| 試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材 | 1.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。 2.自動(dòng)洗板機(jī)。 3.振蕩器。 4.系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，最好用多通道移液器。 |
| 操作程序 | 1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，陰陽性對(duì)照和樣品，建議做復(fù)孔。 2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。 3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。 4、設(shè)置陰陽性對(duì)照、樣本孔和空白孔，陰陽性對(duì)照孔各加陰陽性對(duì)照 50μL，樣本孔加適當(dāng)稀釋后的待測樣本 50μL，空白孔不加，用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 30min。 5、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。如此重復(fù) 4 次（共洗板 5 次）。若使用自動(dòng)洗板機(jī)，請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡 20s 的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。 6、除空白孔外，陰陽性對(duì)照孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體 100μL。 7、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育 30min。 8、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。如此重復(fù) 4 次（共洗板 5 次）。若使用自動(dòng)洗板機(jī)，請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡 20s 的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。 9、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育 15min。 10、所有孔加入終止液 50μL，在 450nm 酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度（OD 值）。 |
| 注意事項(xiàng) | 1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請(qǐng)確保上一次使用之后沒有被污染。 2：酶標(biāo)板單次未使用完，要謹(jǐn)記密封放到 2-8℃保存。 |
| 問題分析 | ①問題描述：標(biāo)準(zhǔn)曲線差 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.試劑盒平衡時(shí)間不夠——不低于 2 個(gè)小時(shí)的室溫平衡 2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌 3.移液不精確——檢查和校正移液器 ②問題描述：精密度低 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡 2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑 3.重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模 4.加樣不精確——檢查和校正移液器 ③問題描述：O.D值低 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑 2.溫育時(shí)間不正確——保證充足的溫育時(shí)間 3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度 4.酶標(biāo)記物或底物失效——通過混合酶標(biāo)記物和底物，顏色迅速顯現(xiàn)來檢查 5.沒有加入終止液——按照說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟加入終止液 6.超出讀數(shù)時(shí)間讀數(shù)——在說明書推薦的讀數(shù)時(shí)間內(nèi)讀數(shù) ④問題描述：樣本值 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.不正確的樣本儲(chǔ)存方式——正確儲(chǔ)存樣本，使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法 3.待測物質(zhì)在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復(fù)實(shí)驗(yàn) |
| 聲明 | 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對(duì)因此產(chǎn)生的問題負(fù)責(zé)，亦不承擔(dān)任何法律責(zé)任。 |
聯(lián)系我們
服務(wù)熱線
掃一掃，加微信客服
版權(quán)所有：泉州市睿信生物科技有限公司 | 閩ICP備18019542號(hào) | 技術(shù)支持：阿儀網(wǎng)
