| 反應(yīng)種屬 | 綿羊 |
| 檢測(cè)范圍 | 0.625ng/mL-20ng/mL |
| 物理性能 | 試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無(wú)破損漏氣。 |
| 用途 | 定量檢測(cè)血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中綿羊自噬啟動(dòng)蛋白1（ULK1）的濃度。 |
| 實(shí)驗(yàn)原理 | 本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。在預(yù)包被抗綿羊自噬啟動(dòng)蛋白1（ULK1）抗體（固相抗體）的微孔酶標(biāo)板中，加入綿羊自噬啟動(dòng)蛋白1（ULK1）校準(zhǔn)品和待測(cè)樣本，再加入另一株 HRP 標(biāo)記的抗綿羊自噬啟動(dòng)蛋白1（ULK1）抗體（酶標(biāo)抗體），經(jīng)過(guò)溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀 450nm波長(zhǎng)上測(cè)定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）與待測(cè)樣品中綿羊自噬啟動(dòng)蛋白1（ULK1）的濃度正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線，可以計(jì)算出樣本中綿羊自噬啟動(dòng)蛋白1（ULK1）的濃度。 |
| 特異性 | 本試劑盒識(shí)別天然和重組綿羊自噬啟動(dòng)蛋白1（ULK1），與結(jié)構(gòu)類似物無(wú)交叉。 |
| 重復(fù)性 | 板內(nèi)變異系數(shù)均<10%，板間變異系數(shù)均<15%。 |
| 回收率 | 回收率在 85%-115%之間。 |
| 試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材 | 1、酶標(biāo)儀（450nm） 2、精密移液器及一次性吸頭 3、蒸餾水 4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī) 5、37℃水浴鍋或恒溫箱 6、500ml 量筒 |
| 操作程序 | 所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。 1、按前面說(shuō)明書描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。 2、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。 3、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、0 值孔、空白孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，0 值孔加樣本稀釋液 50μL，空白孔不加，樣本孔加待測(cè)樣本 50μL。 4、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔、0 值孔和樣本孔，加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL。 5、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育 60min。 6、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20S，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù) 5 次。若使用自動(dòng)洗板機(jī)，請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡 30s 的程序，可以提高檢測(cè)的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。 7、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育 15min。 8、所有孔加入終止液 50μL，在酶標(biāo)儀 450nm 波長(zhǎng)上讀取各孔吸光度（OD 值）。 |
| 注意事項(xiàng) | 1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請(qǐng)確保上一次使用之后沒(méi)有被污染。 2：酶標(biāo)板單次未使用完，要謹(jǐn)記密封放到 2-8℃保存。 |
| 問(wèn)題分析 | ①問(wèn)題描述：標(biāo)準(zhǔn)曲線差 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.試劑盒平衡時(shí)間不夠——不低于 2 個(gè)小時(shí)的室溫平衡 2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌 3.移液不精確——檢查和校正移液器 ②問(wèn)題描述：精密度低 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.洗滌不充分——按說(shuō)明書要求充分洗滌和浸泡 2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑 3.重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模 4.加樣不精確——檢查和校正移液器 ③問(wèn)題描述：O.D值低 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑 2.溫育時(shí)間不正確——保證充足的溫育時(shí)間 3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度 4.酶標(biāo)記物或底物失效——通過(guò)混合酶標(biāo)記物和底物，顏色迅速顯現(xiàn)來(lái)檢查 5.沒(méi)有加入終止液——按照說(shuō)明書實(shí)驗(yàn)操作步驟加入終止液 6.超出讀數(shù)時(shí)間讀數(shù)——在說(shuō)明書推薦的讀數(shù)時(shí)間內(nèi)讀數(shù) ④問(wèn)題描述：樣本值 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.不正確的樣本儲(chǔ)存方式——正確儲(chǔ)存樣本，使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法 3.待測(cè)物質(zhì)在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復(fù)實(shí)驗(yàn) |
| 聲明 | 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對(duì)因此產(chǎn)生的問(wèn)題負(fù)責(zé)，亦不承擔(dān)任何法律責(zé)任。 |
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